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PK-1人胰腺導管腺癌細胞

更新時間:2025-03-06

簡要描述:

細胞名稱: PK-1人胰腺導管腺癌細胞
種屬來源: 人 性別年齡: 男性
種屬來源: 胰腺生長特性: 貼壁生長細胞形態(tài): 不規(guī)則細胞樣
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型號:YZ-X1088點擊量:70
品牌研尊生物貨號YZ-X1088
規(guī)格T25或1mL凍存管供貨周期現貨
主要用途科研實驗

 

PK-1人胰腺導管腺癌細胞

產品信息

細胞名稱: PK-1人胰腺導管腺癌細胞

種屬來源:   

性別年齡: 男性

種屬來源:   胰腺

生長特性: 貼壁生長

細胞形態(tài):   不規(guī)則細胞樣

細胞規(guī)格:  1 X 106cells/T251 mL凍存管

培養(yǎng)條件:  RPMI1640 +10% fetal bovine serum

37 , 5% CO2

凍存條件:  90% FBS + 10% DMSO

傳代方法:1:3傳代, 2-3天傳1

細胞培養(yǎng)操作

干冰運輸:收到細胞后需立即轉入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復蘇

常溫運輸:收到細胞后,請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代

細胞傳代:細胞密度達80% - 90%,即可進行傳代培養(yǎng)

 

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟

 對于貼壁培養(yǎng)的細胞,寄送前,我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶,以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

  1. 收到細胞后,請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因為運輸過程中存在顛簸,且有些細胞對溫度變化也很敏感,可能存在一些細胞脫落漂浮的情況,這些細胞仍是活細胞,請勿丟棄,可離心富集后傳代使用。

  2. 對于貼壁細胞,在生物安全柜環(huán)境中,用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基,至剩余5-8mL 左右,隨后根據培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養(yǎng)瓶,請立即傳代。

  3. 對于懸浮的細胞,在生物安全柜環(huán)境中,轉移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管,150 g 離心 5 分鐘,去除上清后,用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞,轉移至新的培養(yǎng)瓶中,隨后置于合適的CO2含量的37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

凍存管細胞操作步驟

注意: 為保證細胞的高活率,請收到產品后,立即解凍培養(yǎng)。

  1. 將凍存管置于37水浴中來回晃動,迅速解凍。為避免污染,確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約1分鐘。

  2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

  3. 將凍存管中的液體轉移到含有5mL完培養(yǎng)基的離心管中,150 g 離心 5 分鐘,用真空泵去除上清。

  4. 用全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復蘇的存活率,請將培養(yǎng)基在37水浴預熱后使用。

  5. 將細胞置于含有合適CO2的37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

貼壁細胞傳代培養(yǎng)

  1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,加入PBS潤洗一次。

  2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液,并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育,直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。

  3. 加入2mL全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶,并輕輕吹打將細胞從培養(yǎng)瓶表面吹落,并使細胞分散。

  4. 將細胞懸液收集到15mL離心管里,150 g 離心 5 分鐘,用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸,轉移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

懸浮細胞傳代可參考以下方法:

 一、直接傳代法

    1、待懸浮細胞長滿至 80%~90%(細胞懸液變黃),即可傳代;
    2、用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3;
    3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。

 二、離心傳代法(在發(fā)現有細胞碎片的情況下)

    1、將細胞懸液轉移到離心管內;
    2、150 g 離心 5 min,棄去上層清液;
    3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞;
    4、吸管吸取適量細胞懸液,裝入新的培養(yǎng)瓶,再加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。

 

細胞凍存操作

1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,    DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1 x 106/mL,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

2. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80°C冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。

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